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雞一氧化氮 ELISA試劑盒做標準曲線(xiàn)樣品檢測時(shí)注意事項

日期:2020-11-26瀏覽:847次

雞一氧化氮 ELISA試劑盒做標準曲線(xiàn)樣品檢測時(shí)注意事項:
1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線(xiàn)計算出來(lái)的,所以首先要把做標準曲線(xiàn)看作是比做正式實(shí)驗還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗結果無(wú)從談起。
2、設置標準曲線(xiàn)樣品的標準濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測實(shí)驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線(xiàn)濃度范圍之內,包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線(xiàn),盡量要使實(shí)驗樣品的濃度在中間坡度陡段,即曲線(xiàn)幾乎成直線(xiàn)的范圍內。
3、采用倍比稀釋法配制標準曲線(xiàn)中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會(huì )出現較大的偏離。
4、檢測標準樣品時(shí),應按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。
5、標準曲線(xiàn)的樣品數一般為7個(gè)點(diǎn),但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標準曲線(xiàn)相關(guān)系數因實(shí)驗要求不同而有所變動(dòng),但一般來(lái)說(shuō),相關(guān)系數R至少要大于0.98,對于有些實(shí)驗,至少要0.99甚至是0.999。
計算以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線(xiàn),根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shí)際濃度。
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