白介素27ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素6（IL-6）水平。用純化的人白介素6（IL-6）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素6（IL-6），再與HRP標記的白介素6（IL-6）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素6（IL-6）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度（OD值），通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品中人白介素6（IL-6）濃度。

　　白介素27ELISA試劑盒的樣本要求：

　　1、血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。

　　2、血漿:應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。

　　3、尿液:用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

　　4、細胞培養上清:檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　5、組織標本:切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　6、標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

　　7、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。