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廠(chǎng)商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
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更新時(shí)間:2025-04-09
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產(chǎn)品名稱(chēng):大鼠腸黏膜上皮細胞
組織來(lái)源:腸組織
產(chǎn)品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶
培養信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養基 含FBS、生長(cháng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(cháng)特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞簡(jiǎn)介:
大鼠腸黏膜上皮分離自腸道組織;腸道指的是從胃幽門(mén)至的消化管。腸是消化管中最長(cháng)的一段,也是功能最重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內進(jìn)行的,大腸主要濃縮食物殘渣,形成糞便,再通過(guò)直腸經(jīng)排出體外。腸道堪稱(chēng)身體最勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物,以提供足夠的養分,其實(shí)它的功能還遠不止此——它還是機體內最大的微生態(tài)系統。腸黏膜上皮細胞是機體內外環(huán)境的重要屏障,持續暴露于大量抗原中,也是機體面對病原微生物的道防線(xiàn)。因此,腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉運等重要生理功能之外,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著(zhù)重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,它決定黏膜免疫反應的發(fā)生、性質(zhì)和強度。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗室分離的大鼠腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過(guò)上皮細胞專(zhuān)用培養基培養篩選制備而來(lái),細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗室分離的大鼠腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養。
a)、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。
b)、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數換液方式,棄半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。
收到細胞如何處理?
1、首先,觀(guān)察細胞培養瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有,請拍照,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續服務(wù)依據)。
2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面,顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題,部分貼壁細胞會(huì )有少量從瓶壁脫落;先不要打開(kāi)培養瓶蓋,將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時(shí),以便穩定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū),了解細胞相關(guān)信息,如貼壁特性(貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后,取出細胞培養瓶,鏡檢、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續服務(wù)依據);建議細胞傳代培養后,定期拍照、記錄細胞生長(cháng)狀態(tài)。
5、貼壁細胞:若細胞生長(cháng)密度超過(guò)80%,可正常傳代;若未超過(guò)80%,移除細胞培養瓶?jì)扰囵B基,預留5ml左右繼續培養,直至細胞密度達80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞:將細胞培養瓶?jì)纫后w全部轉移至50ml無(wú)菌離心管內,1200rpm離心5min,離心后上清培養基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時(shí),若細胞密度超過(guò)80%,可將細胞懸液分至2個(gè)細胞培養瓶?jì)扰囵B,補加培養基至5ml;若細胞密度未超過(guò)80%,將細胞懸液移至原瓶繼續培養,直至細胞密度達80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作
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