產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品型號：

廠(chǎng)商性質(zhì)：經(jīng)銷(xiāo)商

訪(fǎng)問(wèn)量：343

更新時(shí)間：2025-04-09

本網(wǎng)站銷(xiāo)售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療！

產(chǎn)品名稱(chēng)：兔骨骼肌成纖維細胞

組織來(lái)源：骨骼肌

產(chǎn)品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

培養信息：

培養基：含FBS、生長(cháng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(cháng)特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以?xún)葼顟B(tài)優(yōu)良

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞簡(jiǎn)介：

兔骨骼肌分離自四肢肌肉組織；骨骼肌又稱(chēng)橫紋肌，肌肉中的一種，約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長(cháng)柱形的多核細胞，肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌，橫紋肌還包括心肌與內臟橫紋肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結構和功能的器官，有豐富的血管、淋巴分布，在軀體神經(jīng)支配下收縮或舒張，進(jìn)行隨意運動(dòng)。肌肉可根據共形狀、大小、位置、起止點(diǎn)、纖維方向和作用等命名。依形態(tài)命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨狀肌等。骨骼肌細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方。肌細胞內有許多沿細胞長(cháng)軸平行排列的細絲狀肌原纖維。每一肌原纖維都有相間排列的明帶（Ⅰ帶）及暗帶（A帶）。明帶染色較淺，而暗帶染色較深。暗帶中間有一條較明亮的線(xiàn)稱(chēng)H線(xiàn)。H線(xiàn)的中部有一M線(xiàn)。明帶中間，有一條較暗的線(xiàn)稱(chēng)為Z線(xiàn)。兩個(gè)Z線(xiàn)之間的區段，叫做一個(gè)肌節。骨骼肌細胞也稱(chēng)橫紋肌細胞，細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方，細胞多呈梭行，具有一定的方向性。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗室分離的tu骨骼肌成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗室分離的兔骨骼肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過(guò)夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1、首先，觀(guān)察細胞培養瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續服務(wù)依據）。

2、用75%酒精擦拭細胞培養瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細胞狀態(tài)。因運輸問(wèn)題，部分貼壁細胞會(huì )有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養瓶蓋，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養2-4小時(shí)，以便穩定細胞狀態(tài)。

3、仔細閱讀細胞說(shuō)明書(shū)，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。

4、靜置完成后，取出細胞培養瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續服務(wù)依據）；建議細胞傳代培養后，定期拍照、記錄細胞生長(cháng)狀態(tài)。

5、貼壁細胞：若細胞生長(cháng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細胞培養瓶?jì)扰囵B基，預留5ml左右繼續培養，直至細胞密度達80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。

6、懸浮細胞：將細胞培養瓶?jì)纫后w全部轉移至50ml無(wú)菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細胞密度超過(guò)80%，可將細胞懸液分至2個(gè)細胞培養瓶?jì)扰囵B，補加培養基至5ml；若細胞密度未超過(guò)80%，將細胞懸液移至原瓶繼續培養，直至細胞密度達80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作

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